生物检测报告 篇1
适用场景:食品出口检验流程管理、食品质量控制标准执行
内容看点:食品出口企业质量管控指南、微生物检测操作实务手册
行文逻辑:样品采集→检验准备→微生物检测→结果记录
____-__集团简介
____-__集团位于风光秀丽的黄海之滨,地处中国山东对外开放的黄金地带,与日本群岛,朝鲜半岛隔海相望,集团下辖30多处企业,总资产14亿元,职工8000多人.20__年实现销售收入12亿元,出口创汇3800万美元,是全国乡镇企业出口创汇十强企业.
集团创建于1978年,以集团化,跨国化,现代化为目标,全方位实施跨国经营战略,成为一处渔,工,贸,科,教一体化经营的国家级企业集团.先后与日本,美国,韩国,香港,中国台湾等国家或地区的客商建立了15处合资企业,实际利用外资20__万美元,其中食品加工企业10处.设计开发出"____-__"牌系列食品,具有营养丰富,方便快捷等特点,现已形成200多个品种,年产量5万吨的生产规模,企业内部管理上建立健全iso——9001质量管理体系,并全面实施计算机网络化管理,1998年____-__食品通过美国fda认证,取得了haccp验证书,并在欧盟注册成功,从而打开了通向欧美市场的绿色通道.集团在日本,美国,香港,朝鲜等国家或地区成立了分公司或办事处,在国内16个大城市设立了销售分公司,建立起完善的市场营销网络.
____-__产品目前具有排类系列,汉堡系列,串类系列,菜卷系列,主食系列,粗加工系列,休闲系列等十余个系列,300多种规格.产品口味多样,适合不同的消费需求.主要原料大部分来自海鲜,高蛋白,低脂肪,营养丰富.
化验中心简介
化验中心于1992年筹建,占地面积260平方米,随着公司对外贸易的开展,实验室的建设得到不断的加强.本室现有12名成员.中心拥有气相色谱,液相色谱,原子荧光光度计,旋转蒸发器,恒温箱,水浴箱等先进仪器,齐备的国内外有关标准,完整的规章制度,能够独立承担本公司的进出口食品的检验工作.
化验中心质量方针
1.本实验室严格执行国家进口标准及法令.
2.对本公司所属加工厂的进出口商品实行严格,认真,公正的检验,提供准确真实的检验结果.
3.本实验室认真遵守公司的纪律及规章制度,独立执行行业业务范围内的任务,不受行政干预和影响,不从事影响其公正地位的任何活动,实验室负责人对其业务范围内的工作负责.
微生物部分
一.样品管理流程图
样品编号
添好取样记录单
核对登记样品处理
ú
感官检验微生物检验
检验余样处理
二.微生物室的规章制度
为了使工作有条不紊,特对微生物室做如下规章制度:
1实验室内禁吸烟和饮食,2.不3.得在实验室内从事任何和检验无关的活动
4实验室应经常保持清洁,5.并常备6.3%-5%的来苏水以供擦拭工作台面及一般消毒时用
7取样要有代表性.要以无菌的方式取样,8.样品要以1份1kg(1份不9.低于500g)为标10.准,11.并加贴标12.签,13.冷冻食品在取样时要保持冷冻状态(直到交给样品保管员)
14样品保管员应及时将取回的样品登记,编号,存放,冷冻食品要保持原状态(直到检验前)
15在检验中和食品及其稀释液试剂,16.培养基接触的一切17.器皿必须经过有效灭菌.所有检验操作必须严格遵守无菌操作程序.检验结束后所有带菌的培养基试剂稀释液和器皿必须尽快灭菌和洗刷.清洁过的器皿不18.应残留洗涤痕迹.
19工作人员进入实验室操作时,20.必须穿工作服21.,22.带工作帽,23.口罩进行检验时注意工作服24.,鞋帽和手部消毒及实验室空气消毒,25.以免污染样品,26.影响结果的准确性
27实验室所用的仪器,设备28.的性能,29.应定期检查和矫正.各种仪器的使用均应严格遵守仪器使用规则.如发生故障应及时报告修理.
30实验结束后,31.应认真进行实验结果的记录和报告.
32样品的保存期限,33.出口一般保存在半年以上,34.保存至索赔期满过一个月.
10.样品的处理,由样品保管员提出处理意见,经负责人批准后执行,任何人不得私自处理样品.
11.工作人员离开实验室前,应做好门窗水电的安全检查和地面,案面的样品清洁工作,然后将工作服,帽挂在指定的地点,用3%的来苏水或0.2%过醋酸液泡手1-2min再用肥皂洗刷干净后方可离开.
三实验室检验依据
1.产品成品及半成品:每天每车间至少5份样品(根据产品的种类规格及批次递增).
2.原辅料:每次进货时抽取.
3.样品数量:每份样品的数量不4.低于500克.
5.各单位水氯检测每天一次,6.一年对所有水龙头都检测到.
检查项目
1.生产用水(包括水):细菌总数,大肠菌群.
2.表面样品:(包括工人手,工器具,工作台与产品直接接触的包装物等):细菌总数,大肠菌群,大肠杆菌,沙门氏菌,金黄色葡萄球菌.
3.原辅料:细菌总数,大肠菌群,大肠杆菌,沙门氏菌,金黄色葡萄球菌.
4.成品及半成品:细菌总数,大肠菌群,大肠杆菌,沙门氏菌,金黄色葡萄球菌.
5.空气落菌:细菌总数.
检验依据
1.水质检验:gb5750-85
2.取样依据:sn0330-94
3.细菌总数:sn0168-92
4.大肠菌群:sn0169-92
5.大肠杆菌:sn0169-92
6.金黄色葡萄球菌:sn0172-92
四,样品处理过程
1.采样者填写采样记录单,2.主要项目:采样时间,地点,单位,样品名3.,采样品的份数及采样者名4.字.
5.检验者根据采样记录单填写检验记录单主要项目:采样时间,检验时间,被检单位,样品名6.称和菌落计数等.
7.将数份样品按照检验记录单的顺序排好,8.剪样,9.用225ml灭菌水加入到均质带中,10.放入均质机中均质1min.
11.将均质的样品液做.0.1或0.01mol/l的稀释液,12.在培养皿中加1ml的稀释液.(注:带有面包粉的产品做0.01mol/l浓度的稀释).
13.倒皿,14.倒双层.
15.将2ml的稀释液加入已经备16.好的检验大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的试管中.
17.在剪样过程中对各样品约10克放入sc沙门氏菌的增菌液中.
18.将培养皿放入37摄氏度的培养箱中培养48小时计数.
19.将样品做沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的增菌液挑出在其选择性培养基上划线鉴定,20.观察大肠杆菌的产气情况.
21.填写检验记录单,22.细菌总数,23.大肠菌群计数,24.大肠杆菌,沙门氏菌,金黄色葡萄球菌的检出与否.
附a培养基的配置
1.根据药品配置的用量,2.将培养基配好,3.每瓶400ml,4.结晶紫中性红胆盐琼脂用于大肠菌群的计数,5.平板计数琼脂用于计细菌总数.要将结晶紫中性红胆盐琼脂煮沸三次用报纸封口放入水浴箱中保温待用.平板计数琼脂要经高压灭菌,6.121摄氏度度,7.15min后放入水浴箱中保温待用.
8.ec肉汤按照要求的比例配置,9.试管中要加杜氏小管,10.121摄氏度放三次气,11.保证杜氏小管没有气泡干扰实验结果.ec肉汤用小试管每管加8ml.
12.nacl肉汤也同13.样按照要求的量配置,14.用大试管加10ml要高压灭菌121摄氏度15min.
15.盐水每管9ml高温灭菌121摄氏度15min.
b计数后废皿的处理
1 .将废皿放入灭菌锅中121摄氏度15min.
2.将废皿中培养物液倒出,3.用洗洁精清洗干净,4.再用水冲洗干净.
5.将废皿叠放入铁桶中将放气的孔对好放入高温箱中干燥160摄氏度以上3h
6.将皿放入无菌间摆放好,7.小盖向上待用.
csn0168-92sn0169-92sn0170-92sn0172-92
五,微生物检验项目及详细步骤
食品平板菌落计数:
1.培养基和试剂
1.1平板计数琼脂:称取9.4g于400ml蒸馏水,1.2加热溶解,1.3121摄氏度15min高压灭菌(每瓶约倒八个样品的板)
1.4225ml无菌生理盐水:将每个小三角瓶中装入225生理盐水,1.5盖盖,1.6于121摄氏度15高压灭菌
1.79ml无菌生理盐水:于大试管中装入9ml盐水,1.8塞上皮塞,1.9于121摄氏度15min高压灭菌
1.108.5g/l盐水:称取8.5g氯化钠溶解于1000ml蒸馏水中,1.11搅拌至溶解,1.12分装于三角瓶和大试管中.
2.样品匀液制备3.:
用75%乙醇在包装口处擦拭后取样,称取25g样品,加入225ml无菌生理盐水,均质1min,制成1:10的样品匀液.
用灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液1ml,放入装入9ml盐水的大试管中,用吸管连续吸取几次混匀.制成1:100稀释液,依次制备成1:1000样品匀液.
4.平板接种:
3.1选择合适的稀释度,用灭菌吸管吸取1ml样品液放入作了适宜标志的平板内.每个稀释度的样品一般做两个板.
3.2倒板:先到入一层平板记数琼脂,立即将平板内的样品液和琼脂培养基充分混合,待琼脂凝固后,再倒入少量琼脂,覆盖均匀
3.3同时做空白对照.(有时9ml,225ml生理盐水都要做空白).
5.培养:
待琼脂凝固后将平板翻转,立即放入37摄氏度左右的恒温箱培养箱培养48h左右.
6.菌落记数和记录:
培养后立即记数,25——250个菌落为合适范围.如两个板上的菌落在合适范围内,先计算两个板的平均值.再将平均值乘以相应的稀释倍数,作为每克(毫升)样品中平板菌落数).
注:稀释度的选择一般凭经验来,细菌少的,一般做1:10稀释度(如汉堡,面包粉);一般肉制品做1:100稀释度(如菜卷,鱼排);新产品一般做1:100和1:1000稀释度.
食品中大肠菌群,大肠杆菌的检验3come文档频道
1.培养基及试剂
结晶紫中性红胆盐琼脂(vrba):称取16.6g溶于400ml蒸馏水中,充分搅拌,煮沸2min,置于水浴箱中备用,临用时制备.
1.2ec肉汤:称取37g溶于1000ml蒸馏水中,加热至完全溶解,分装于小试管中(每支10ml),加入杜氏小管,121摄氏度15min高压灭菌.
1.3伊红美蓝琼脂(emb):称取7.5g溶于200ml蒸馏水中,加热溶解.待冷却后倒板,放置在冰箱中备用.
1.131:10样品稀释液:做平板记数时制备1.14的.
2大肠菌群mpn的测定
2.1取1:10样品稀释液1ml注入作了适宜标3.志的平皿内,4.将冷却
至45度左右的结晶紫中性红胆盐琼脂倾注于每个平皿内,小心旋转平皿,将培养基与样液充分混合.
5.2待琼脂凝固后,6.再加3---4mlvrbs覆盖平板表层.
7.3翻转平板,8.置于36度培养(本实验培养48h)
2.4计数,计数平板上出现的典型大肠菌群落,典型菌落为紫色,菌落周围有红色的胆盐沉淀环.
9.大肠杆菌的检验
3.1吸取2ml1:10样品稀释液于ec肉汤管中,放入带盖44.5摄氏度水浴箱中,培养24h,水浴箱的水平面应高于肉汤培养基液面.
3.2观察ec肉汤管中是否产酸产气,取其产酸产气管的培养物划线于emb平板36摄氏度培养24h.
3.3检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落.
注:最近原料胡椒粉中常出现大肠杆菌.
出口食品沙门氏菌检验
1.培养基及试剂
1.1亚硒酸盐胱胺酸增菌液:在小三角瓶中装入90ml蒸馏水,2.高压灭菌后,3.加入2g(大约1勺)sc,4.振摇使其完全溶解,5.备6.用.
1.2硫乳琼脂(dhl)(为弱选择性培养基,2.用于沙门氏菌,3.志贺氏菌的选择性分离):称取15g溶于200ml蒸馏水,4.浸泡,5.煮沸至完全溶解,6.冷却倾注灭菌平板(大约例十二三个平板)
1.3三糖铁琼脂:称取65g溶于1l蒸馏水中,加热溶解,分装于13__100mm的小试管中,115℃高压灭菌15min,然后制成斜面琼脂.
7.增菌培养:
无菌操作剪一些样品放入sc增菌液中,作好标志,于37度培养24h左右,进行直接选择性增菌.
8.分离培养
将增菌液摇匀,以无菌操作,用接种环挑取一环,划线于dhl平板上,于37度培养24h左右.
9.观察:
观察有无特征菌落:无色透明有黑色中心或几乎全为黑色,有些菌株无色半透明.
5.生化签定:
沙门氏菌出现典型菌落后,用接种针挑取2个典型菌落接种于尿素酶琼脂一管,接种后无须灭菌接种针,直接再分别接种于三糖铁琼脂两管于37℃培养24±2h.
6.结果:
三糖铁琼脂
斜面底层产气硫化氢尿素酶琼脂ka+(—)+(—)-(变黄)
注:k—产碱,a—产酸,+——阳性反应,(—)——少见反应,———阴性反应.
注:一般肉类,鱼类制品做沙门氏菌的检验.
食品中金黄色葡萄球菌检测方法
1,培养基及试剂
1.17.5%nacl肉汤:称取88g溶于1l蒸馏水中,1.2加热煮沸至完全溶解,1.3分装于大试管中(每支10ml),1.4121度1min高压灭菌.
1.5b—p:称取溶于40ml0蒸馏水中,1.6加热煮沸至完全溶解,1.7121度15min高压灭菌,1.8冷却后,1.9加入四支亚碲酸盐卵黄增菌液,1.10摇匀.倾注灭菌平板.
1.111:10样品稀释液:菌落记数时制备1.12的.
2.增菌培养:无菌操作,3.吸取2ml1:10样品稀释液,4.注入7.5%氯化钠肉汤试管中,5.于36度左右培养24h.
6.平板记数:
无菌操作,用接种环挑取一环,划线于b---p平板上,将平板翻转,36度左右培养24h.挑选典型菌落进行记数.
金黄色葡萄球菌的单个菌落在b—p琼脂平板上呈圆形,表面光滑,凸起,湿润,直径2---3mm,灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带.
理化部分
1,有机磷的检验方法:
1.原理
含有机磷的试样在富氢焰上燃烧,以hpo碎片的形式放射出526波长的特性光,这种光通过滤光片选择后,由光电倍增管接收,转换成电信号,经微电流放大器放大后被记录下来,试样的峰面积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定量
2.仪器
天平,组织捣碎机,漏斗,小药勺,磨口三角瓶,旋转蒸发器,移液管(5ml),无菌注射器,5ul滤膜,小离心管,记号笔
3.试剂
乙酸乙酯,无水硫酸钠
4.方法
称取25.0g样品,加入50ml乙酸乙酯,约25g无水硫酸纳,置于组织捣碎机中,捣碎过滤用10ml乙酸乙酯洗涤残渣两次,并入滤液,将滤液置于旋转蒸发器上蒸干,用2.5ml乙酸乙酯定容,用注射器经过滤膜注入小离心管中,供气相色谱测定.
5.色谱条件
色谱柱:毛细管柱
色谱柱的温度:60(2min)10/min
进样口温度:260摄氏度,检测器温度:280摄氏度
载气和尾气:氮气:纯度99.99%,0.5ml/min(前压0.62ml/min),
尾吹气:30ml/min;
氢气:50kpa,空气30kpa
进样口:分流/不分流毛细管进样口
进样方式:不分流进样.
出峰顺序:敌敌畏,甲胺磷,氧化乐果,乐果,毒死稗,对硫磷
二,有机氯的检验方法:
1仪器
天平,组织捣碎机,漏斗,三角瓶(有磨口三角瓶),大离心管,旋转蒸发器,无菌注射器,滤膜,移液管(5ml,10ml),试管架,吸管,旋涡混匀器,离心机
2试剂
丙酮,正己烷,20g/l硫酸钠
3方法
称取20g样品,精确至0.1g,加入10ml丙酮,置于捣碎机中,捣碎过滤.
准确吸取20ml20g/l硫酸钠溶液,1ml0正己烷,5ml滤液,于离心管中,混匀离心.取上清液通过盛有无水硫酸纳的漏斗,再于离心管中加入10ml正己烷,混匀离心,将上清液同样过滤,用2ml正己烷清洗漏斗内残渣,将合并的滤液于旋转蒸发器上浓缩至干,再以正己烷2ml定容供气相色谱测定.
4仪器条件
柱温:270摄氏度,进样口温度:280摄氏度,检测器温度:300摄氏度.
尾吹气:30ml/min,进样方式:不分流.
出峰顺序:氯氰菊酯,氰戊菊酯.
3,六六六的检测方法:
气相色谱法原理:样品中六六六,滴滴涕经提取,净化后用气相色谱法测定,与标准比较定量.电子捕获检测器对于负电极强的化合物具有较高的灵敏度,利用这一特点,可分别测出微量的六六六和滴滴涕.不同异构体和代谢物可同时分别测定.
1.试剂:使用的试剂一般系分析纯,2.有机溶剂需经重蒸馏.
2.1丙酮,正己烷,石油醚(沸程30——60c)苯,硫酸,无水硫酸钠,硫酸钠溶液(20g/l)
2.2六六六滴滴涕标准液:准确称取各样品10.0mg,溶于苯,分别移入100ml容量瓶中,加苯至刻度,混匀.每毫升含农药100.0ug,作为储备液储备液存于冰箱中.
2.3六六六滴滴涕标准使用液:将上述标准储备液以己烷稀释至适宜浓度,一般为0.01ug/ml.
3仪器:
组织捣碎机,旋转蒸发器,
4分析步骤
4.1提取
4.1.1称取具有代表性的样品(适用于生的及烹调加工过的蔬菜,水果或谷类,豆类,肉类,蛋类)约200,加适量水,于捣碎机中捣碎,混匀.称取匀浆2.00——5.00g,于50ml具塞三角瓶中,加10——15ml丙酮,在振荡机振荡30min,过滤于100ml分液漏斗中,残渣用丙酮洗涤四次,每次4ml,用少许丙酮洗涤漏斗和滤纸,合并滤液30——40ml,加石油醚20ml,摇动数次,放气.振摇1min,加20ml硫酸钠溶液(20g/l)振摇1min,静置分层,弃去下层水溶液.用滤纸擦干分液漏斗颈内外的水,然后将石油醚液缓缓放出,经盛有约10g无水硫酸纳的漏斗,漏入50ml三角瓶中.再以少量的石油醚液分三次洗涤原分液漏斗,滤纸和漏斗,洗液并入滤液中,将石油醚浓缩,移入10ml具塞试管中,定容至5.0ml或10.0ml.
4.1.2净化
5.0ml提取液加0.50ml浓硫酸,盖上试管塞.振荡数次后,打开塞子放气,然后振荡0.5min,于1600r/min,离心15min,上层清液,供气相色谱分析用.
4..2测定
4.2.1气相色谱参考条件
4.2.1.1色谱柱:内径3~4mm,长1.2~2m的玻璃柱,内装涂以ov—17{15g/l}和qf—1{20g/l}的混合固定液的80~100目硅藻土.
4.2.1.2__ni_电子捕获检测器:汽化室温度:215摄氏度;色谱柱温度:195摄氏度;检测器温度:225摄氏度;载气{氮气}流速:90ml/min;纸速:0.5cm/min.
4.2.2测量与计算
电子捕获检测器的线性范围窄,为了便于定量,选择样品进样量使之适合个组分的线性范围.根据样品中六六六,滴滴涕存在形式,相应的制备各组分的标准曲线,从而计算出样品中的含量.
六六六,滴滴涕及异构体或代谢物含量按式{1}计算.
__1=a1__100/m1__(v1/v2)__100
__1-样品中六六六,滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量,mg/kg;
a1-被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量,ng;
v1-样品净化液体积,ml;
v2-样液进样体积,ul;
m1-样品质量,g.
结果的表述:报告平行测定的算术平均值的两位有效数.
4,氢化物原子荧光光谱法
1.原理:
热消化后,在酸性介质中,试样中的铅与硼氢化钠(nabh4)或硼氢化钾(kbh4)反应生成挥发性铅的氢化物(pbh4).以氩气为载气,将氢化物导入电热石英原子化器中原子化,在特制铅空心阴极灯照射下,基态铅原子被激发至高能态;在去活化回到基态时,发射出特征波长的荧光,其荧光强度与铅含量成正比,根据标准系列进行定量.
2.试剂
硝酸+高氯酸(4+1)混合酸:分别量取硝酸400ml,高氯酸100ml,混匀.
盐酸溶液(1+1):量取250ml盐酸倒入250ml水中,混匀.
草酸溶液(10g/l):称取1.0g草酸,加入溶解至100ml,混匀.
铁氰化钾[k3fe(cn)6溶液(100g/l):称取10.0g铁氰化钾,加水溶解并稀释至100ml,混匀.
氢氧化纳溶液(2g/l):称取2.0g氢氧化纳,溶于1l水中,混匀.
硼氢化钠[nabh4]溶液(10g/l):称取5.0g硼氢化钠溶于500ml氢氧化纳溶液(2g/l)中,混匀,用前现配.
铅标准储备液1.0mg/ml)
铅标准应用液(1.0ug/ml):精确吸取铅标准储备液(1.0mg/ml),逐级稀释至1.0ug/ml.
3.仪器
双道原子荧光光度计或同类仪器.
计算机系统及编码铅空心阴极灯.
电热板
分析步骤
4.试样消化
湿消解:称取固体试样0.20g~2.00g,液体试样2.00g(或ml)~10.00g(或ml),置于50ml~100m消化容器中(锥形瓶),然后加入硝酸+高氯酸(4+1)混合酸5ml~10ml摇匀浸泡,放置过夜.次日置于电热板上加热消解,至消化液呈淡黄色或无色(如消解过程色泽较深,稍冷补加少量硝酸,继续消解).稍冷加入20ml水再继续加热赶酸.至消解液0.5ml~1.0ml止,冷却后用少量水转入25ml容量瓶中,并加入盐酸(1+1)0.5ml,草酸溶液10g/l.5ml,摇匀,再加入铁氰化钾(100g/l)1.0ml,用水准确稀释定容至25ml.摇匀,放置30min后测定.同时做试剂空白.
标准系列制备:取25ml的容量瓶7支,依次准确加入铅标准应用液(1.00ug/ml)0.00`0.125`0.25`0.50`0.75`1.00`1.25ml(各自相当于铅浓度0.0`5.0`10.0`20.0`30.0`40.0`50.0ng/ml),用少量水稀释后,加入盐酸(1+1)0.5ml草酸(10g/l)0.5ml摇匀,再加入铁氰化钾(100g/l)1.0ml,用水准确稀释至刻度,摇匀,放置30min后待测.
5.结果计算
试样中铅含量按式(2)进行计算.
__=(c-c0)__v__1000/m__1000__1000````````````````````````(2)
式中:
__——试样中铅含量,单位为毫克每千克或毫克每升(mg/kg或mg/l)
c——试样消化液测定浓度,单位为纳克每毫升(ng/ml)
c0——试剂空白液测定浓度,单位为纳克每毫升(ng/ml)
m——试样质量或体积.单位为克或毫升(g或ml)
v——试样消化总体积,单位为毫升(ml)
计算结果保留三位有效数字.
5,海洋生物体中汞的测定——冷原子荧光法
1.范围及应用领域
本方法适用于海洋生物体中汞的测定.对含碘量高的海洋生物样品,应加入适量的硝酸银消除碘对测定的干扰.
2.方法原理
在硝酸——高氯酸体系中消化海洋生物样品,将生物体中汞全量转化为汞离子进入溶液.用硼氢化钾作为还原剂将溶液中的汞离子还原成单质汞,以氩气为载气使原子汞蒸汽进入原子荧光光度计的原子化器中,用特种汞空心阴极灯为激发光源,测定汞原子荧光强度.
3试剂
硝酸(优级纯),高氯酸(优级纯),盐酸(高纯),草酸溶液(1%):称取10g分析纯草酸(c2h2o4)溶解于100ml去离子水中.
4操作方法
称取2.0g样品放入三角瓶中,加入10ml硝酸,1ml高氯酸,盖上表面皿,放置过夜,次日将样品置于390摄氏度左右的电热板上加热,消化至黄棕色烟雾散尽,消化液清凉透明,近无色或淡黄色为止,取下冷却至室温,加入5ml盐酸,全部转移到100ml容量瓶中,用1%草酸溶液定容,混匀静置20min后上机测试,同时制备空白.
6,海洋生物中砷的测定——原子荧光法
1.方法原理:
生物样品经硝酸---高氯酸消解后,以硼氢化钾做还原剂将砷还原成挥发性氢化物,以氩气为载气使挥发性氢化物进入原子荧光光度计的原子化器中,进行原子荧光测定.
2.试剂
硝酸(有机纯),高氯酸(优级纯),
5%硫脲+3%抗坏血酸混合溶液:称取12.5g硫脲和70g抗坏血酸溶于250ml水中(使用前配制)
3.操作方法
称取2g样品于三角瓶中,加入10ml硝酸,盖上表面皿,摇匀后放置过夜,次日将样品置于电热板上,在400摄氏度
内加热消化.消化至溶液近无色,消化时不能蒸干,再加入1高氯酸.加热消化至剩少量溶液,取下三角瓶,冷却用水定量移入100ml容量瓶中,加5ml硫脲+抗坏血酸还原剂,用水定容至100ml,充分摇匀后待.同时制备分析空白液.
7,甜蜜素的测定
1.样品处理:
称取固体样品5g于离心管中,加入2ml(1+1)硫酸溶液,5ml正己烷,ml1次氯酸钠(有效氯含量大于5%)剧烈混合,离心.取正己烷层移入另一只离心管中,加入10ml碳酸钠(5g/100ml)调至碱性,混合,离心,取正己烷层进样.
2.色谱条件:
检测器:紫外检测器
流动相:乙腈:水(70:30)或甲醇:水(80:20)
波长:314nm
流量:1ml/min
进样量:10ul
8,沙星类抗生素残留量——高效液相色谱法
1.样品处理
取样5.0g放入离心管中,取25ml乙腈及10ml无水硫酸钠,进行高速匀质,以3000转/分,离心5min,将上层溶液移入分液漏斗中,加入乙腈饱和正己烷溶液25ml,震荡,然后将乙腈层移入100ml磨口三角瓶中,将首次离心后残渣中再加入25ml乙腈,震荡30s,以3000转/分,离心3min,然后将上清液移入刚才分离后装有乙腈饱和正己烷的分液漏斗中,震荡5min,分离乙腈层,合并乙腈层于三角瓶中,加入正丙醇10ml,使用旋转蒸发器减压蒸干(水浴40摄氏度),残留物中加入乙腈:水(14:86)1,震荡30s,溶解.将内容物转入离心管中,加入乙腈饱和正己烷溶液,以3000转/分,除去正己烷层之后,取出乙腈——水层10ul作为hplc和试样溶液.
2.色谱条件:
柱温:22摄氏度
流动相:乙腈,水+0.3%乙酸(14:86)
流速:1ml/min
检测器:紫外检测器
波长:270nm
出峰顺序:氟诺沙星,环丙杀星,恩诺杀星
9,防腐剂的处理方法
1.样品处理:
称取样品5g于100ml容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀,静置,经滤膜过滤,进样.
2.色谱条件:c18柱
流动相:甲醇+乙酸铵溶液(0.02mol/l)(5:95)
流速:1.0ml/min
进样量:10ul
检测器:紫外检测器,波长230nm,灵敏度:0.2ufs
根据保留时间定性外标峰面积定量.
10,磺胺残留量检验方法
1.样品处理:
称取3g均匀试样,置于50ml离心管中,加入0.5ml10%硫酸钠水溶液和4.4ml乙腈—氯仿混合溶液(10+1).在涡流混匀器上混合成匀浆,以提取磺胺.其后,离心3min(3000r/min).用尖嘴吸液管将上清夜转入第二支离心管中,再用2ml乙腈—氯仿混合溶液(10+1)提取残渣,离心3min,提取液并入第二支离心管中,将该离心管置于气流加热快速浓缩装置中,小于40摄氏度蒸发至干.向残渣添加1ml2%硫酸钠水溶液和2ml正己烷,在涡流混匀器上剧烈混合,使残渣溶解,离心3min,用尖嘴吸液移去己烷层,并弃去,再用2ml正己烷洗水相一次,同法弃去己烷层,分别向水相中加入3ml和2ml乙腈—氯仿混合溶液(1+2),于涡流混合器上剧烈混合,离心3min,用尖嘴吸液管将下层有机相转入第三支离心管中,置于气流加热快速装置内,小于40摄氏度蒸发干,以流动相溶解残渣,并准确定容1ml,过滤.上清夜供lg测定
2.色谱条件:
柱温:22摄氏度
流动相:水+0.3%乙酸:乙腈(70:30)
流速:1
检测器:紫外检测器
波长:285
出峰顺序:磺胺嘧啶,磺胺二甲嘧啶,磺胺甲氧嘧啶,磺胺间甲氧嘧啶,磺胺喹恶啉
十一,so2的测定gb/t5009.34---1996
1.原理
亚硫酸盐与四氯汞钠的反应生成稳定的络合物,再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物,与标准系列比较定量,本方法最低检出浓度为1
2.试剂:
1,四氯汞钠吸收液:称取13.6g氯化高汞及6.0gnacl,2,溶于水中并稀释至100ml,3,放置过夜,4,过滤后备5,用
6,亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾,7,加水并稀释至100ml
8,甲醛溶液(2):吸取0.55ml甲醛(36%),9,加水稀释至100ml,10,混匀
11,乙酸锌12,溶液:称取22g乙酸锌13,溶于少量水中,14,加入3g冰乙酸,15,加水稀释至100ml
16,盐酸副玫瑰苯胺溶液:称取0.1g副玫瑰苯胺于研钵中,17,加少量水研磨使溶解并稀释至10ml0.取出20ml,18,置于100ml容量瓶中,19,加入盐酸(1+1),20,充分摇匀后使溶液由红变黄,21,如不22,变黄再滴加少量盐酸至出现黄色,23,再加水稀释至刻度,24,混匀备25,用.
3.样品测定:
称取固体样品5—10g研磨均匀的样品,用少量水湿润并移入100ml容量瓶中,然后加入20ml四氯汞钠吸收液,浸泡4小时以上,再加入亚铁氰化钾溶液及乙酸锌溶液各2.5ml,最后用水稀释至100ml刻度,过滤备用
吸取10ml样品处理于50ml比色管中.
另吸取0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.5,2.0mlso2标准使用液,分别置于50ml比色管中.
于样品及标准品中各加入四氯汞钠吸收液至10ml,然后加入1ml氨基磺酸钠溶液,1ml甲醛溶液及1ml盐酸副玫瑰苯胺溶液,摇匀,放置20min,于550nm处测定吸光度,绘制标准曲线比较.
十二,火腿及其它肉制品中亚硝酸盐的测定
1.样品处理:
取1g样品加入2.5ml硼砂,用70°c的水烧杯内的物质转移到100ml容量瓶中,煮沸15min,放冷,加2.5ml乙酸锌和2.5ml亚铁氯化钾,定容,放置30min,过滤.
2.测定:
吸取10ml滤液于50ml比色管,加入2ml对氨基苯磺酸溶液,混匀,置5min,加入1ml盐酸萘乙二胺溶液,置5min于540nm处测定.
3.试剂:
硼砂饱和液:50g硼砂放入500ml热水中.
4g/l对氨基苯磺酸:称取0.4g对氨基苯磺酸溶于100ml水中,避光保存.
亚铁氰化钾:10.6g亚铁氰化钾于100ml水中.
乙酸锌:称22g乙酸锌于少量水中,加冰乙酸3ml,稀释至100ml.
十三,氯霉素的测定
1.原理:
elisa基础是抗原抗体反应.抗体被包被在微孔板的小孔中,含有抗原的样品或标准品与抗原酶标记物被加入到小孔中,游离的抗原与抗原酶标记物竞争抗体结合位点,没有结合的抗原酶标记物在清洗步骤中被除去,加入底物和显色剂培养.结合的抗原酶标记物将无色的发色剂转化为有色物质,然后加入终止液(终止液可能会使刚生成的有色物质转化成其他颜色的物质)最后测定吸光度,吸光度值与样品中的抗原浓度成正比.
检测范围:肉类,水产类,牛奶,蜂蜜,血清,尿样
2.设备:
均质器,离心机,恒温水浴箱,旋转蒸发器,混合器,酶标仪,离心管,刻度移液管,加样器
3.试剂:
乙酸乙酯,正己烷
4.样品前处理
(1)肉类,水产类前处理:
取3g切碎的样品置于离心管中,加入6ml乙酸乙酯均质,以3000r/min离心10min,取2ml上清夜置于另一支离心管中,在旋转蒸发器上蒸干.在此离心管中加入2ml正己烷,震荡混合,再加入1ml无色抽取试样稀释液,震荡混合约10s,以离心机3000r/min10min,利用吸管吸去中间乳化层部分的上清夜(正己烷层),取100ul待测.用氯霉素酵素免疫检验试剂套组检测检体中所含的cap浓度
(2)蜂蜜的前处理:
取蜂蜜2g,置于小离心管中加入4ml水溶液,加入2ml乙酸乙酯后,震荡摇匀然后3000r/min离心10min,取上清夜0.5ml置于萃取管中于水浴60摄氏度下蒸干,加入0.5ml无色抽取试样稀释液混合后,震荡约10s取100ul待测.用氯霉素酵素免疫检验试剂套组检测检体中所含的cap浓度
(3)牛奶前处理:
取牛奶0.2ml,加入红色生乳稀释液0.8ml,振荡混合(1:4倍稀释),用氯霉素酵素免疫检验试剂套组检测检体中所含的cap浓度.
十四,检验结果报告单
实习总结
我从4月21号到6月12号在威海____-__集团实习.期间从4月21号到5月29号先被分到集团中心化验室.5月30号到6月12号在____-__大学生创业园实习.
刚到公司的时候不熟悉情况,主任没有给我们安排具体工作,只是在微生物的培养室帮忙,第一天我就炖坏了培养基烧瓶,以后我细心观察,自己动手操作配制,从剪样,均质,稀释,倒皿到培养,划线,计数每个步骤都认真学习,从开始的陌生到后来的一一熟练,最终可以自己独立娴熟的操作.通过这十天的学习,才发现我们在学校学到的只是一些比较单纯的理论知识,缺乏实践因而也就对所学的知识缺乏深刻全面的理解,难以举一反三,限制拓宽自己的知识面.
5月1日,我从生化区调往理化区.跟着烟大毕业的一位同事做食品中的so2,亚硝酸盐,盐分,水分,消毒水中的有效氯,游离碱等等,工作比较繁忙,但从中学到了很多的东西.理化实验对计量的严格要求,以及对国标行标的频繁接触让我对理化检验和色谱前处理都有了更深的认识.有机氯,有机磷,抗生素,甜蜜素和防腐剂的检测让我对色谱操作有了简单了解.另外,对一些理化分析常用仪器的操作(如旋转蒸发仪,震荡仪,酶标仪,离心机,分光光度计等等)也慢慢熟练.经过半个多月的学习,我基本已经能独立完成非色谱检测的所有实验和色谱检测的所有前处理工作.在学校里,我觉得自己总有眼高手低的缺点,认为自己的知识已经达到一定的水平,能力也不底.而通过实践才发现自己的知识在很多方面存在漏洞.以后的日子我把自己当作一个刚刚进入食品行业的新员工,把工作岗位当作新的起点,脚踏实地,虚心请教每一位同事,努力完善自己的专业知识.
5月29日,我被分到大学生创业园工作,因为公司尚未正式成立,所以所做的工作都比较初级.前几天清理机器打扫卫生,接着是更换罐装燃气,运作主体烤箱试生产,卸面粉,鲜虾饼,鱿鱼,扇贝等原材料,最后是实验性生产和包装.短短十几天的车间工作,对我却是莫大的考验,莱农艰苦奋斗的精神一直给我鼓舞.虽然挺苦挺累,但最终挺了过来,并掌握了整套生产工艺.以上的经历让我认识到与人沟通的重要性和诚信在社会生活工作中的巨大作用,也对艰苦奋斗的精神有了进一步的理解.以后我将把它们为我工作中的路标.在实践中使自己的技能不断的丰富积累,再联系在学校学到的知识,使之融会贯通,在此基础上自己才有可能提高分析问题解决问题和独立工作的能力.
通过近两个月的实习使我有机会将在学校学习的理论知识应用于实践,丰富了理论知识也提高了实际工作能力,同时在踏入社会的过程中学会了怎样与人诚信相处,怎样与人交流沟通,为以后踏上社会奠定了基础,有利于以后的工作和学习.
生物检测报告 篇2
适用场景:食品质量检测、实验室操作规范
内容看点:食品检测方法参考、实验室操作指南
行文逻辑:样品处理→梯度稀释→平板接种→培养观察→菌落计数
一、实验目的
测定某品牌酸奶样品中的乳酸菌数量,评估其微生物质量,为食品安全评价提供科学依据。
二、实验原理与方法
采用平板计数法(PCA法)进行乳酸菌数量测定。该方法基于乳酸菌在MRS培养基上形成清晰可辨的菌落,通过统计平板上的菌落数量来推算样品中乳酸菌的浓度。
三、实验材料与设备
实验材料:某品牌酸奶样品、MRS培养基、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌吸管、酒精灯、接种环、灭菌平皿等。
实验设备:恒温培养箱、显微镜、菌落计数器、稀释器等。
四、实验步骤
样品处理:取新鲜未开封的"酸奶样品10 g,加入90 mL无菌生理盐水中,充分混匀制成10^-1稀释液。
梯度稀释:从10^-1稀释液中分别取1 mL,加入到含有9 mL无菌生理盐水的试管中,依次制作10^-2、10^-3、10^-4稀释液。
平板接种:取各稀释液100 μL,用无菌涂布棒均匀涂抹于MRS培养基上,每个稀释度做三个平行样。
培养观察:将接种后的平板放入恒温培养箱中,于37℃下厌氧培养48小时。
菌落计数:培养结束后,选取菌落数在30-300个之间的平板进行菌落计数,记录结果。
生物检测报告 篇3
适用场景:实验室环境评估、无菌操作规范验证
内容看点:实验室空气质量分析、无菌操作重要性解读
行文逻辑:取样→制备培养基→高压灭菌→分装培养液→染色观察
空气是人类赖以生存的必须环境,也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子,这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。而实验室中的环境是更为重要的,对微生物的要求更加的高,一个好的实验室环境可以让实验结果更加的精确。本实验通过对实验室空气的采集,对微生物的培养及染色观察来证明证明实验室环境存在微生物,也证明无菌操作的重要性。
正文:
前言
实验室空气微生物含量多少可以反映该实验室的空气质量,需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。实验室的空气中微生物越少,代表在该实验室做微生物实验的时候误差会小,成功率会高。本实验以牛肉膏蛋白胨琼脂培养基培养实验室中的微生物,利用革兰氏染色法及显微镜观察实验室中空气中的微生物种类及形态。
1.材料方法
1.1实验材料
1.1.1样品来源
实验室空气
1.1.2药品
氢氧化钠(固体),牛肉膏,蛋白胨,琼脂粉,Nacl。
1.1.3耗材
培养基(牛肉膏蛋白胨琼脂培养基)无菌水,石棉网,电炉,酒精灯,培养皿,三角瓶,500ml烧杯,玻璃棒,超净工作台,Ph试纸。
1.2方法
1.2.1取样
采集实验室空气样本
1.2.2制作培养基
在500ml烧杯内加水200毫升,放入牛肉膏1.0g、蛋白胨2.0g和氯化钠1.0g,做记号,放在火上加热,待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂4.0g,不断搅拌以免粘底。停止加热后冷却,加入配置的NaOH溶液调节PH值至7.2-7.5后倒入三角瓶。
1.2.3高压灭菌
将培养皿和三角瓶用报纸及绳包装后,利用高压灭菌锅将培养皿和装有培养液的三角瓶高压灭菌,121度维持20分钟.
1.2.4分装培养液及加入样本
在超净工作台上将三角瓶中的培养液分装到6个培养皿当中,等培养皿中培养液冷却凝固,将其中三个加入实验室中的空气样本,二个加入超净工作台空气,一个作为对照组。对照组A,实验组B贴标签做记号,倒置放入培养箱中培养。
1.2.5革兰氏染色,观察其种类,形态
将培养好的带有微生物菌落的培养基拿出,取干净的载玻片于实验台上,在载玻片中央滴一滴无菌蒸馏水,将接种环在火焰上烧红,待冷却后从斜面挑取少量菌种与玻片上的水滴混匀后,在载玻片上涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰外层尽快的来回通过2~3次,共约2~3秒钟,放置待冷后,进行染色。初染:用结晶紫染色1m(转载于:www.hnNscy.CoM:空气微生物)in后水洗,吸干。媒染:加碘液1min后水洗,吸干。脱色:用脱色液(95%乙醇)脱色30s,水洗,吸干。复染:用番红复染3min,水洗,吸干。待标本片干后置显微镜下,用低倍镜观察,发现目标物后用油镜观察,注意细菌细胞的颜色。
2.结果与分析
2.1实验结果
2.2分析
此次实验实验目的基本完成,但仍存在一些误差。本实验采取1个培养基无菌作为对照组,另外5个作为实验组,3个采用实验室空气,2个采用超净工作台空气(1)5个实验组中,有一个培养皿没有生长出细菌,由于倒培养基操作时培养液倾倒过少,导致无法满足细菌生长代谢繁殖的所需能量。(2)如图四,是培养皿中长出的细菌,经查询,此细菌为呼吸道内的杂菌,由于操作时操作者不慎咳嗽将菌注入培养皿中。(3)如图6使用革兰氏染色法,但镜下观察有重叠现象,制片时为彻底打散细菌。
3.讨论
本实验除了略微操作失误以外,其他良好,经讨论,我们认为无菌操作时十分重要的,本实验操作简单,步骤清晰,答题没有改动的地方,但在其中一个操作过程中,把培养皿直接放在教室中和超净工作台上是不可取的,导致上述分析中的
(2)失误。我们应该更加注重无菌操作。
3.参考文献
[1].《公共场所空气的微生物检测报告》孙艳萍
[2].《图书馆内外空气微生物检测及资源保护》王伯秋
[3].《基础生物学实验技术》主编:陈永富哈尔滨工程大学出版社2009
生物检测报告 篇4
适用场景:实验室人员岗位调整、年度工作总结汇报
内容看点:微生物检测流程优化、实验室人员成长路径、年度工作改进方向
行文逻辑:工作调整→内容学习→趋势分析→记录完善→总结提升
20xx年即将过去,本年度各项工作基本告一段落,在新的一年即将到来之际对20xx年度的工作内容作简单总结回顾,明确得失,吸取教训,积累经验,以更好的进行20xx年的工作。
年初由内毒素组调至微生物限度组,参与微生物限度组各项日常工作,包括生产用水各个项目的检验及趋势分析,非无菌成品、原料、包材等的微生物限度检查,料液的微生物负载试验;并学习一些相关的验证方面的内容,包括水系统验证、产品微生物限度检查方法验证等。在各位领导同事的悉心指导下,收获颇丰,进步良多。
下半年由微生物限度组调至环境组,了解学习包括涉及实验室用菌种鉴别、使用、保存,菌液制备等相关工作,以及车间环境监测趋势分析,培养基的检测与使用,参与806车间20xx年第三季度环境趋势分析与趋势图的制作。在此之前在无菌组、微生物限度组的工作中也会涉及到环境组的部分内容,如菌液使用方面、培养基的领用发放等工作需要与环境组进行沟通,通过在环境组的学习,对环境组日常工作细节内容有一个初步的"认识和大概的了解,尤其对车间环境检测方面各项内容有了更加全面的认识和体会。自进入安替工作就在微生物室学习与工作,对车间各项工作的了解大都通过领导同事的讲述,涉及车间相关规程的学习等,通过车间环境监测记录的填写、环境趋势的分析等各项工作内容,对车间工作方面有了更为深刻的理解,相信会对今后各项工作的顺利开展起到很大的帮助。
在环境组工作不足两月,调至无菌组参与无菌组各项日常工作的进行与管理。之前在无菌组工作将近一年时间,对无菌组的各项日常工作已有较为全面调理的了解认识,包括无菌产品、无菌包材等的无菌检查,无菌检查用品的准备与灭菌,限度检查用品的准备与灭菌,阳性菌室操作用物品的准备与灭菌,培养基以及蛋白胨水、碳酸钠溶液的配制、灭菌灵敏度检验、发放、停滞试验等,酶的检测与使用,无菌室环境监测及相关记录,无菌有关各项记录的填写与汇总整理,样品领取,实验室各公用记录的领用管理等等各方面。
工作每天都在进行,我们也在不断地进行各项工作内容的调整完善与进步。调至无菌组一月多以来,首先主要做的就是了解适应无菌组各项工作目前的情况,现在较一年半前我们有包括大量新员工在内的人员对各项工作进行了调整、完善,较之前我们现在做的较好的内容有很多,我们的各项用品基本已全部建立详细的发放使用记录,仅集菌培养器方面,上月已基本将最后一批两筒使用完毕,今后可适时建立起相应的发放记录。无菌检查、微生物限度检查及车间乳糖验证用酶已建立起较完善的检验、发放、使用记录系统。诸如此类,不一一赘述。
20xx年即将到来,我会以饱满的精神状态来迎接新的一年。接下来的工作中会面临更多的机会和挑战,我会踏踏实实,在挑战与挫折中站稳脚步。目光不能只限于自身周围的小圈子,要着眼于大局,着眼于今后的发展。我也会向其他同志学习,取长补短,相互交流好的工和经验,共同进步。征取更好的工作成绩。
生物检测报告 篇5
适用场景:微生物实验操作指导、实验室数据记录规范
内容看点:实验操作流程详解、显微镜测量方法
行文逻辑:装目镜测微尺→校正目镜测微尺→菌丝体大小测定→血球计数板使用→酵母菌计数
一、实验原理
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征,也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定,需要在显微镜下,借助于特殊工具—测微尺,包括目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺适用于校正目镜测微尺每个的相对长度。然后,根据微生物细胞相当于目镜测微尺的个数,即可计算出细胞的实际大小。
实验程序ⅰ(测定微生物的大小)
测定的工具:目镜测微尺镜台测微尺
实验程序ⅱ(测定微生物的大小)
目镜测微尺的校正:在高倍镜下,看清镜台测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行,移动推动器,使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合,然后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10μm,所以可得:
目镜测微尺每格长度(μm)=(镜台测微尺格数×10)/目镜测微尺格数
注意:校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的接物镜、接目镜、镜筒长度等)进行,而且只能在这特定的情况下才可重复使用。
菌体大小的测定:取下镜台测微尺,将细菌染色标本置于载物台上,然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。
操作步骤
1、装目镜测微尺
2、校正目镜测微尺
3、菌丝体大小测定:将观察的黄曲霉菌丝体直接进行菌丝体大小的测定
4、测定完毕后,取出目镜测微尺用擦净纸擦干净,放回盒内保存。
第三节微生物的显微计数
血球计数板通常是一块特制的厚载玻片,载玻片上有四条槽而构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽而隔成两半,每个半边上面各刻有一个方格网。
每个方格网共分九大格,其中间的一大格又称为计数室,微生物的计数就在此大格中进行。
常用的血球计数板的计数室有两种规格的刻度网格。
一种是一个大方格分成16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格,即为16×25。
另一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格,即25×16。
但是不管计数室是那种规格,其计数室的小格数总是相同的,即16×25=25×l6=400(小格)计算
每一个大方格边长为1mm,则每一大方格面积为1mm2。盖上盖玻片后,载玻片计数室与盖玻片之间的高度为0、1mm,所以每个计数室(大方格)的体积为0、1mm3。
在计数时,通常数五个中方格的总菌数,求得平均值。再乘上16或25就得一大方格中的总菌数。然后再换算成1毫升菌液中的总菌数。
(1ml=1cm3=1,000mm3)
二、实验材料
酵母菌悬液
显微镜,血球计数板。
盖玻片,无菌滴管,吸水纸,擦镜纸,香柏油、镜头洗液。
1、取清洁无油的血球计数板,在计数室上面加盖血盖片。
2、取酵母菌液,摇匀,用滴管由盖玻片边缘滴一小滴,使菌液自行渗入,计数室内不得有气泡。
3、用10×镜观察并将计数室移至视野中央。
4、在10×镜下计数:计数4个(或5个)中格的平均值,然后求得每个中格的平均值。乘上16(或25)就得出计数区总菌数,最后再换算到每ml菌液中的含菌数。
5、注意事项:计上不计下,计左不计右。出芽计一半
实验程序计数步骤:
1、取清洁无油的血球计数板,在计数室上面加盖玻片。
2、取酵母菌液,摇匀,用滴管由盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多),使菌液自行渗入,计数室内不得有气泡。
3、静置5分钟后,将血球计数板置于显微镜载物台上,先用低倍镜找到计数板的大方格网位置。寻找时光圈要缩小,光线要偏暗些,并将计数室移至视野中央。
4、在高倍镜下计数:随机地计数五个中格内的菌数,然后求得每个中格的平均值。乘上16(或25)就得出一大格中的总菌数,最后再换算到每毫升菌液中的含菌数量。
由于菌体细胞在血球计数板上处于不同的空间位置,要在不同的焦距下才能看到,故观察时必须不断调节微调节器,方能数到全部菌体,以免遗漏。
5、计算方法:
酵母菌细胞数/毫升=[(x1+x2+x3+x4+x5)/5]x25(或16)×10×1000×稀释倍数
6、注意事项。
计数时,为避免重复或遗漏计数,凡是遇到压在方格线上的菌体,一般以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内,遇到有芽体的酵母时,如果芽体和母体同等大时,就按两个酵母菌体计数。
7、计数完毕后,血球计数板要立即清洗干净,并用吸水纸吸干,最后用擦镜纸擦干净并放回盒。
将显微计数结果记录于下表中。t表示五个中方格中的总菌数;d表示菌液稀释倍数。

